鼠伤寒沙门菌sseK2基因缺失株的构建及其生物学特性研究

摘要：

目的 检测sseK2基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供新思路.方法 首先通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除1047 bp sseK2基因并成功构建缺失株及其回复株,进而检测其生物学和免疫学特性.结果 PCR、双酶切及测序结果分析,证实构建了SL1344△sseK2缺失株及其回复株.生物学特性研究表明,缺失株SL1344△sseK2保留了亲本株SL1344的血清型1,4,[5],12:i:1,2,且能够稳定遗传缺失后的sseK2基因,生化特性和生长速度并未发生明显改变,但与亲本株SL1344相比,其毒力发生明显改变.缺失株SL1344△sseK2口服感染6周龄BALB/c小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD50)为3.44×108菌落形成单位(colony-forming units,CFU),毒力较亲本株SL1344降低了1620倍.免疫保护效力试验显示,缺失株免疫17 d后对鼠伤寒沙门菌野生株攻毒小鼠的保护率为62.5％,小鼠免疫14 d后血清抗体IgG达到最高.回复株与亲本株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平.结论 成功构建了SL1344△sseK2基因缺失株,其遗传稳定,毒力明显降低,且具有较好的免疫原性,推测sseK2对SL1344的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及评估其作为用于减毒活疫苗的候选株提供参考.

关键词：鼠伤寒沙门菌SL1344、重组自杀性质粒、缺失株SL1344△sseK2、回复株SL1344C-△sseK2、生物学特性

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资助基金：河南省自然科学基金项目182300410078Natural Science Foundation of Henan Province of China182300410078

在线出版日期：2019-06-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：256-263