CdaR-DAC信号系统调控钩端螺旋体合成第二信使分子c-di-AMP

摘要：

目的 确定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)LA3304基因产物DAC合成c-di-AMP的活性,LA3303基因产物CdaR增强DAC酶活.方法 采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株LA3304基因,并构建其原核表达系统.Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rDAC.采用高效液相色谱法(HPLC)检测rDAC环化ATP底物为c-di-AMP的活性.采用细菌双杂交法检测CdaR与DAC相互作用情况.构建细菌共表达系统,结合HPLC法检测CdaR增强DAC酶活情况.结果 所构建的问号钩体赖株LA3304基因原核表达系统在IPTG诱导下能高效表达rDAC,Ni-NTA亲和层析法提纯的rDAC经SDS-PAGE后显示为单一蛋白条带.rDAC具有体外合成ATP底物为c-di-AMP的功能.CdaR与DAC存在相互作用,CdaR可显著增强DAC酶活(P<0.05).结论LA3304基因产物DAC具有c-di-AMP合成酶活性,CdaR可增强DAC活性,并与DAC构成CdaR-DAC信号系统,共同参与调节钩体c-di-AMP合成.

关键词：钩端螺旋体、c-di-AMP、DAC、CdaR

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资助基金：国家自然科学基金81501713;浙江省自然科学基金LY18H190001 National Natural Science Foundation of China81501713;Natural Science Founda-tion of Zhejiang Province of ChinaLY18H190001

在线出版日期：2019-01-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：881-885