黏菌素耐药细菌mcr-1基因TaqMan PCR快速检测方法的建立

摘要：

目的 建立一种快速灵敏准确的分子检测方法用来检测临床分离菌株中的mcr-1基因.方法 根据mcr-1基因的序列设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,同时构建含有mcr-1基因片段的重组质粒作为阳性标准品,采用TaqMan探针荧光定量PCR方法检测耐药基因mcr-1,并对方法的敏感性、重复性和特异性进行评价.结果 TaqMan探针荧光定量PCR结果显示起始模板量与Ct值之间存在良好的线性关系(R2>0.999),检出下限为10拷贝/μl,比常规PCR敏感性高100倍;特异性检测显示只有含mcr-1基因的菌株结果为阳性,其余菌株为阴性;组内及组间重复性试验的变异系数均小于1％.利用所建立的方法对150株临床分离的耐药菌株进行检测,检测到2株菌株携带mcr-1耐药基因,2株菌株鉴定均为大肠杆菌.结论 建立的TaqMan探针荧光定量PCR检测耐药基因mcr-1的方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的优点,可用于临床检验上特异性检测携带mcr-1基因的临床耐药菌株,为临床药物治疗提供更好的依据.

关键词：黏菌素耐药、mcr-1基因、PCR检测、TaqMan探针

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资助基金：国家自然科学基金61704157National Natural Science Foundation of China 61704157

在线出版日期：2018-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：710-715