免疫荧光法检测杆状病毒滴度的建立及验证

摘要：

目的 建立并优化生产用重组杆状病毒滴度间接免疫荧光检测方法,并进行初步验证.方法 将96孔板贴壁培养的SF9细胞,接种杆状病毒溶液共孵育一定时间后间接免疫荧光法显色.通过对细胞使用浓度、孵育时间及优化显色处理条件(固定液、封闭液、抗体种类及使用条件),建立杆状病毒滴度间接免疫荧光检测方法,进行特异性、准确性、重复性和中间精密度验证,并与杆状病毒滴度酶联检测试剂盒检测结果进行比较.结果 细胞使用浓度为0.6×106个/ml、共孵育时间为3d;显色条件优化后确定了冰冻甲醛-丙酮溶液为最适固定溶液和5％的山羊血清封闭液,一抗和二抗稀释比例均为1:200、37℃温育1 h时显色效果最佳.用该方法检测不同样品,仅杆状病毒组出现特异性荧光斑点.本方法与试剂盒酶联法检测结果趋势相同,其线性相关系数R2=0.996,表明两种方法具有良好的正相关性;重复性及中间精密度验证结果的变异系数CV均<10％.结论 建立了重组杆状病毒滴度的间接免疫荧光检测方法,该方法具有良好的特异性、准确性、重复性和中间精密度,可用于生产中病毒滴度的检测.

关键词：杆状病毒、病毒滴度、间接免疫荧光方法

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在线出版日期：2018-10-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：702-709