问号钩端螺旋体对THP-1和J774A.1细胞NLRP3炎症小体活化的影响

摘要：

目的：了解问号钩端螺旋体(钩体)对THP-1和J774A.1细胞NLRP3炎症小体活化的影响,为钩体感染不同宿主后引起不同炎症性反应的科学解释提供依据。方法分别采用real-time RT-PCR和流式细胞术检测问号钩体56601株感染的THP-1及J774A.1细胞NLRP3 mRNA及蛋白表达水平,采用ELISA结合NLRP3阻断试验检测细胞IL-1β、IL-18和IL-33表达水平。结果问号钩体感染1 h、2 h、4 h、12 h和24 h后,THP-1细胞NLRP3 mRNA水平分别为未感染细胞的4.05、0.34、0.33、0.06和1.66倍,J774A.1细胞分别为未感染细胞的12.98、16.19、10.68、5.8和0.57倍(P<0.05)；THP-1细胞NLRP3蛋白表达率分别从感染前的9.26%上升至94.01%、89.24%、31.80%、19.74%和11.28%(P<0.05),J774A.1细胞分别从感染前的18.71%上升至58.78%、43.64%、36.42%、76.46%和85.21%(P<0.05)；THP-1细胞 IL-1β分别上调至73.07 pg/ml、939.24 pg/ml、939.24 pg/ml、843.22 pg/ml和851.06 pg/ml(P<0.05),J774A.1细胞IL-1β在感染后12 h出现上升,感染12 h和24 h的浓度分别为191.17 pg/ml和254.4 pg/ml(P<0.05),THP-1细胞IL-18浓度分别为913.89 pg/ml、808.19 pg/ml、483.54 pg/ml、204.19 pg/ml和189.09 pg/ml(P<0.05),J774A.1细胞IL-18在感染后24 h出现上升,浓度为113.37 pg/ml,THP-1细胞IL-33水平无明显变化(P>0.05),而J774A.1细胞感染后 IL-33水平在12 h 和24 h 后略有上升(P<0.05)。钩体感染引起 THP-1和J774A.1细胞IL-1β、IL-18和IL-33升高均能被NLRP3特异性阻断剂有效阻断(P<0.05)。结论人和小鼠巨噬细胞感染钩体后NLRP3炎症小体均发生活化并参与介导分泌炎性细胞因子,细胞因子分泌规律存在明显差异,人巨噬细胞感染钩体后IL-1β和IL-18的分泌早于小鼠巨噬细胞,且分泌水平较小鼠巨噬细胞更高。

关键词：问号钩端螺旋体、NLRP3炎症小体、巨噬细胞、炎性细胞因子

所属期刊栏目：36

分类号：R39;R37

资助基金：国家自然科学基金项目81401679,81260250;贵州省优秀青年科技人才培养对象专项资金项目黔科合人字201509号;贵州省高层次创新型人才培养项目经费Qian Ke He 20164021;贵州省传染病人才培养基地项目黔人领发201315号

在线出版日期：2017-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：894-899