HCMV潜伏相关UL138基因重组腺病毒的构建及其对THP-1单核细胞功能的影响

摘要：

目的：构建含人巨细胞病毒( HCMV)潜伏相关 UL138基因的重组腺病毒,探讨UL138基因对THP-1单核细胞功能的影响。方法构建携带UL138基因的重组腺病毒,利用TCID50法确定重组腺病毒滴度。重组腺病毒以不同MOI比值感染THP-1细胞,通过绿色荧光蛋白表达确定感染THP-1细胞最佳MOI值；定量PCR分析UL138表达对THP-1细胞前炎症细胞因子表达变化,通过定量PCR芯片分析趋化因子及受体的表达变化。结果成功构建了携带UL138基因的重组腺病毒,TCID50法测定病毒的滴度达1×1011 PFU/ml。利用重组腺病毒携带的绿色荧光蛋白表达检测THP-1细胞的感染率,结果显示,重组腺病毒以MOI=1∶100感染THP-1细胞,感染率为60%, RT-PCR和Western blot证实了THP-1细胞能够表达UL138,且随着时间的延长,蛋白表达量逐渐增多。定量PCR检测发现,THP-1细胞 UL138过表达后,可明显抑制IL-18、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等前炎性细胞因子的表达。定量PCR芯片分析显示,UL138表达明显改变THP-1单核细胞内趋化因子及受体的表达,除外 CCL17、CCL21、CCL22、XCL2等趋化因子以及 CCR2、CXCR1、CXCR2、 CXCR4及CX3CR1等趋化因子受体在不同时间点上调表达外, CXCL1、CXCL3、CXCL9、CXCL10、CXCL11等大部分趋化因子及受体的表达均显著减少。结论成功构建了可感染THP-1单核细胞的UL138基因重组腺病毒；THP-1单核细胞过表达UL138可明显影响其功能。

关键词：人巨细胞病毒、潜伏感染、UL138、重组腺病毒、THP-1 单核细胞、趋化因子及受体

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分类号：R73;R3

资助基金：国家自然科学基金81472308,81672707,31670922,31470891;浙江省自然科学基金资助项目Y2100909,LY12H05003,LY15H100004Fund program:National Natural Science Foundation of China81472308,81672707,31670922,31470891;Natural Science Foundation of Zhejiang Province of ChinaY2100909, LY12H05003, LY15H100004

在线出版日期：2016-10-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：667-675