以流式细胞术同时检测 caspase-1与碘化丙啶或 AnnexinⅤ分析小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡

摘要：

目的：明确以流式细胞术同时检测 caspase-1与碘化丙啶或 AnnexinⅤ的方法测定小鼠骨髓巨噬细胞炎性死亡的可行性。方法从野生型(wild type,WT) C57BL/6小鼠和/或 C57BL/6背景的 caspase-1-/-小鼠分离骨髓细胞,巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor, M-CSF)刺激分化7 d 成为骨髓巨噬细胞后,分别进行磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS+ATP (三磷酸腺苷)处理。蛋白印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞和上清中的 IL-1β和 caspase-1的切割成熟及分泌情况；乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)检测试剂盒检测细胞上清 LDH 的释放量；以3种流式细胞染色法：TMR red+caspase-1、PI(propidium iodide)+caspase-1和 AnnexinⅤ+caspase-1检测小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。结果 LPS+ATP 处理后,NLRP3炎症小体被激活(细胞和上清中有 IL-1β和 caspase-1的切割成熟和分泌)；WT 即 C57BL/6组细胞上清 LDH 的释放量多于 caspase-1-/-组,表明诱导发生的细胞死亡中存在依赖于 caspase-1的炎性死亡方式；流式细胞术同时检测 caspase-1与 PI 或 AnnexinⅤ,结果显示 LPS+ATP 处理组炎性死亡的百分比显著高于 PBS 组和 LPS 组,与已报道的流式检测 caspase-1+TMR red 方法的结果类似。结论流式细胞术同时检测 caspase-1与 PI 或 AnnexinⅤ的方法可用于确定小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡。与已有的流式检测 caspase-1+TMR red 方法一样,这两种基于流式细胞术的炎性死亡的检测方法,为小鼠骨髓巨噬细胞的炎性死亡提供了更加直观精准的检测手段。

关键词：NLRP3 炎症小体、炎性死亡、流式细胞术

所属期刊栏目：36

分类号：TS2;R52

资助基金：国家自然科学基金31270217,81471931;上海市自然科学基金12ZR1426400Fund program:National Natural Science Foundation of China31270217,81471931;Shanghai Mu-nicipal Natural Science Foundation12ZR1426400

在线出版日期：2016-04-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：149-154