MicroRNA let-7e对LPS诱导的TNF-α表达的影响及机制的初步研究

摘要：

目的 研究let-7e对LPS诱导的人原代单核细胞产生的TNF-α表达的影响及其机制.方法 用全血分离人原代单核细胞,流式细胞术检测单核细胞表面标记CD14;let-7e mimics或mimicsNC瞬转原代单核细胞24 h、36 h、48 h,qRT-PCR和免疫荧光法检测其转染效率;采用1 mg/L LPS刺激原代单核细胞1h、3h、6h、12 h后,ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α的浓度,筛选出LPS最佳刺激时间;qRT-PCR法及ELISA法评估let-7e对LPS诱导原代单核细胞产生TNF-α的影响;Western blot法检测瞬转let-7e mimics后EZH2的表达水平以及瞬转siEZH2后NF-κB p65、ARFGAP1和Arfap-tin2的表达水平.结果 CD14+细胞大于70％;免疫荧光结果显示miRNA模拟物可以转染原代单核细胞,转染率约为70％;let-7e mimics转染原代单核细胞24 h,细胞内即可表达较高水平的let-7e;LPS刺激原代单核细胞12h即可产生较高水平的TNF-α.ELISA结果证实let-7e mimics显著抑制LPS诱导的TNF-α的产生,同时在mRNA水平也得到一致的结果;Western blot结果显示let-7e mimics组EZH2的水平明显低于let-7e mimics NC组,沉默EZH2后胞核中NF-κB p65显著下调,沉默EZH2后囊泡转运调节蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达显著下降.结论 在原代单核细胞中,let-7e显著抑制LPS诱导的TNF-α的表达;其机制可能是let-7e靶向作用EZH2进而调节NF-κB的活性及囊泡转运相关蛋白ARFGAP1和Arfaptin2的表达水平.

关键词：原代单核细胞、let-7e、TNF-α、LPS

所属期刊栏目：35

分类号：R734.2;R331.14;R563

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;广东省自然科学基金;广东省自然科学基金;广东省自然科学基金;广东省科技计划;广东省科技计划;广东省科技计划;广州市科技计划;广州市科技计划;广州市科技计划;中山大学高等学校基本科研业务费专项青年培育项目;广东省器官捐献与移植免疫重点实验室建设项目

在线出版日期：2016-05-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：884-889