小鼠 FcγRⅡb 胞外区重组蛋白的原核表达及对小鼠 SLE 模型的治疗作用研究

摘要：

目的：构建小鼠FcγreceptorⅡ-b （ FcγRⅡb）胞外区蛋白原核表达载体pET-FcγRⅡb，诱导表达并纯化，观察其在系统性红斑狼疮（ SLE）疾病中的预防与治疗作用。方法 PCR扩增获得小鼠FcγRⅡb基因，并将其定向克隆至原核表达载体pET-32 a （＋），构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγRⅡb，经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析正确后，转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG进行诱导蛋白表达，确定最佳诱导条件，经Western blot鉴定正确后，纯化目的蛋白。 ELISA法检测纯化蛋白与小鼠血清中免疫复合物的结合能力。将MRL／lpr SLE小鼠预防组（周龄12周左右）和治疗组（周龄19周左右）各40只随机分成蛋白液60μl组（4．8μg）、120μl组（9．6μg）、180μl （14．4μg）组以及对照PBS组4组，每组10只，通过尾静脉注射将蛋白液注射进入MRL／lpr SLE小鼠体内，连续注射4周，每周1次。注射完成后，观察1周并收集血清，用ELISA法对预防组与治疗组SLE小鼠的可溶性FcγRⅡb的含量以及小鼠抗双链DNA抗体含量进行检测。结果扩增出了小鼠FcγRⅡb 基因，成功构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγRⅡb，IPTG 诱导表达并纯化出重组蛋白。重组蛋白与小鼠血清具有结合力；预防组和治疗组蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别与预防对照组和治疗对照组相比可溶性FcγRⅡb含量增加（P＜0．05），蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）两两比较，差异有统计学意义（P均＜0．05）；小鼠抗双链DNA抗体含量检测结果显示预防组和治疗组蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别与预防和治疗对照组相比，小鼠抗双链DNA抗体含量降低（ P＜0．05）；预防和治疗蛋白组（含60μl、120μl和180μl组）分别进行两两比较后发现随着蛋白注射剂量的增加，小鼠抗双链DNA抗体含量逐渐降低（P＜0．05）。结论获得重组小鼠FcγRⅡb 胞外区可溶性蛋白，初步证实其对SLE模型鼠具有一定的预防和治疗作用。

关键词：小鼠FcγRⅡb、可溶性、治疗和预防、SLE

分类号：TQ4;R73

资助基金：国家自然科学基金81160375

在线出版日期：2016-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：806-811