10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.11.003
小鼠 FcγRⅡb 胞外区重组蛋白的原核表达及对小鼠 SLE 模型的治疗作用研究
目的:构建小鼠FcγreceptorⅡ-b ( FcγRⅡb)胞外区蛋白原核表达载体pET-FcγRⅡb,诱导表达并纯化,观察其在系统性红斑狼疮( SLE)疾病中的预防与治疗作用。方法 PCR扩增获得小鼠FcγRⅡb基因,并将其定向克隆至原核表达载体pET-32 a (+),构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγRⅡb,经PCR、限制性内切酶鉴定及测序分析正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG进行诱导蛋白表达,确定最佳诱导条件,经Western blot鉴定正确后,纯化目的蛋白。 ELISA法检测纯化蛋白与小鼠血清中免疫复合物的结合能力。将MRL/lpr SLE小鼠预防组(周龄12周左右)和治疗组(周龄19周左右)各40只随机分成蛋白液60μl组(4.8μg)、120μl组(9.6μg)、180μl (14.4μg)组以及对照PBS组4组,每组10只,通过尾静脉注射将蛋白液注射进入MRL/lpr SLE小鼠体内,连续注射4周,每周1次。注射完成后,观察1周并收集血清,用ELISA法对预防组与治疗组SLE小鼠的可溶性FcγRⅡb的含量以及小鼠抗双链DNA抗体含量进行检测。结果扩增出了小鼠FcγRⅡb 基因,成功构建原核表达重组质粒小鼠pET-FcγRⅡb,IPTG 诱导表达并纯化出重组蛋白。重组蛋白与小鼠血清具有结合力;预防组和治疗组蛋白组(含60μl、120μl和180μl组)分别与预防对照组和治疗对照组相比可溶性FcγRⅡb含量增加(P<0.05),蛋白组(含60μl、120μl和180μl组)两两比较,差异有统计学意义(P均<0.05);小鼠抗双链DNA抗体含量检测结果显示预防组和治疗组蛋白组(含60μl、120μl和180μl组)分别与预防和治疗对照组相比,小鼠抗双链DNA抗体含量降低( P<0.05);预防和治疗蛋白组(含60μl、120μl和180μl组)分别进行两两比较后发现随着蛋白注射剂量的增加,小鼠抗双链DNA抗体含量逐渐降低(P<0.05)。结论获得重组小鼠FcγRⅡb 胞外区可溶性蛋白,初步证实其对SLE模型鼠具有一定的预防和治疗作用。
小鼠FcγRⅡb、可溶性、治疗和预防、SLE
TQ4;R73
国家自然科学基金81160375
2016-03-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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