问号钩端螺旋体 tlyA 基因原核表达及其表达产物溶血和致炎作用

摘要：

目的：构建问号钩端螺旋体（简称钩体） tlyA基因原核表达系统，确定目的重组表达产物rTlyA溶解红细胞及诱导人THP-1和小鼠J774A．1巨噬细胞分泌致炎细胞因子的作用。方法采用PCR扩增问号钩体黄疸出血群赖型赖株tlyA基因，T-A克隆后测序。采用原核表达载体pET-42a及表达宿主菌E．coli BL21DE3构建tlyA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测rTlyA表达情况， Ni-NTA亲和层析法提纯rTlyA。采用平板法和分光光度法测定rTlyA对绵羊红细胞的溶血活性。采用RT-PCR和Western blot分别检测问号钩体赖株感染THP-1和J774A．1细胞后tlyA基因mRNA水平变化及TlyA外分泌情况。采用ELISA检测rTlyA诱导THP-1和J774A．1细胞分泌致炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的作用。结果所克隆的tlyA基因与GenBank中公布的相应基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为99．2％和99．8％。所构建的tlyA基因原核表达系统能有效表达rTlyA。10μg／ml rTlyA能显示较强的溶解绵羊红细胞活性。问号钩体赖株感染THP-1和J774A．1细胞1～8 h后，tlyA-mRNA水平显著升高（P＜0．05）且出现TlyA外分泌。0．1、1和10μg／ml rTlyA均能使THP-1和J774A．1细胞分泌致炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的水平显著升高（P＜0．05）。结论问号钩体tlyA基因产物TlyA是溶血素并能诱导巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6和TNF-α，可在钩体病炎症反应中发挥重要作用。

关键词：问号钩端螺旋体、tlyA基因、溶血素、表达/分泌、致炎细胞因子

分类号：R44;R3

资助基金：国家自然科学基金81301406；浙江省自然科学基金LQ13H190005； LQ12H16019

在线出版日期：2015-08-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：341-347