10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2015.01.03
microRNA 家族成员 let-7e 对人单核细胞系THP-1细胞活性的影响及机制研究
目的:研究let-7e对单核细胞系THP-1细胞凋亡和细胞因子分泌的影响及其机制。方法免疫荧光法检测cy3标记的mimic 对照转染THP-1细胞转染率,qRT-PCR法检测let-7e mimic及对照、let-7e inhibitor及对照转染THP1-细胞后let-7e的表达;MTT法检测转染后THP-1细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测let-7e靶基因IFI6(interferon alpha-inducible protein 6)、EZH2(enhancer of zeste homolog 2)、caspase-3的表达;转染48h 后THP-1细胞用LPS 刺激2 h收集细胞培养上清,细胞因子芯片法检测上清中炎性因子的表达。结果 miRNA模拟物可以转染THP-1细胞,转染率约为75%,转染 let-7e mimic 12h 、24 h、48 h 后THP-1细胞的 let-7e 表达倍数分别为8.551±0.365、83.893±15.941、38.858±2.743,转染 let-7e inhibitor 12 h、24 h、48 h后THP-1细胞的let-7e表达倍数分别为0.594±0.174、2.427±1.229、3.053±0.207;let-7e mimic转染组THP-1细胞活性升高、凋亡率降低;miranda数据库分析证实let-7e与EZH2、IFI6、caspase-3结合的mirSVR score 分别为-0.1608、-0.5693、-09.423,证实IFI6、EZH2、caspase-3可能是let-7e的靶基因;let7-e mimic转染组IFI6、EZH2、caspase-3表达都有所下降;let-7e mimic 转染组 CD154、粒细胞集落刺激因子( G-CSF)、CD54、IL-13、IL-1RA和IL-23表达有所下降。结论 let-7e有抗THP-1细胞凋亡的作用,可影响LPS诱导的细胞因子的表达。 let-7e可能通过调节其靶基因caspase-3、IFI6、EZH2对THP-1细胞的生物学功能产生影响。
THP-1细胞、let-7e、凋亡、细胞因子
R73;R18
国家自然科学基金资助项目30872350,31370870;广东省自然科学基金资助项目S201302001300,S2012010009050;广东省科技计划2010B050700008,2011 B040300022;广州市科技计划2011J4100084;2010年中山大学高校基本科研业务费青年培育项目10ykpy31
2015-02-11(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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