10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.12.011
不可分型流感嗜血杆菌 LPD 基因分布及其重组表达产物免疫保护作用
目的:了解无荚膜型流感嗜血杆菌(NTHi)临床菌株中外膜脂蛋白 D(LPD)基因分布及其序列保守性,确定重组表达的 LPD(rLPD)免疫原性和免疫保护性。方法采用 PCR 检测 NTHi临床菌株中 LPD 基因,T-A 克隆后测序。构建 LPD 基因原核表达系统,采用 Ni-NTA 亲和层析法提纯表达的 rLPD。采用 SDS-PAGE 和 Bio-Rad 凝胶图像分析系统检测 rLPD 表达情况及其产量。采用ELISA 和 Western blot 检测 rLPD 的抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解 rLPD 对 NTHi 致死性感染的免疫保护效果。结果所有 NTHi 菌株均检出 LPD 基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达98.0%~99.4%和98.5%~100%。所构建的原核表达系统能高效表达 rLPD。rLPD 免疫家兔可产生高效价抗体,NTHi 全菌兔抗血清及 NTHi 感染患儿血清能识别 rLPD 并与之结合。ELISA 结果显示,93.6%(58/62)和53.2%(32/62)NTHi 感染患儿血清分别 rLPD-IgM 和 rLPD-IgG 阳性。100μg或200μg rLPD 对 NTHi 致死性感染小鼠的免疫保护率分别为60.0%或73.3%。结论 LPD基因在 NTHi 菌株中广泛分布且序列保守,其重组表达产物 rLPD 具有良好的免疫原性及一定的免疫保护作用,可作为 NTHi 基因工程疫苗候选抗原之一。
不可分型流感嗜血杆菌、LPD 基因/ 脂蛋白 D、重组表达、免疫原性、免疫保护性
R37;S18
浙江省卫生高层次创新人才培养工程项目[2012]241
2015-02-06(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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