中东呼吸综合征冠状病毒N蛋白的原核表达、纯化和鉴定

摘要：

目的：对中东呼吸综合征冠状病毒（ middle east respiratory syndrome coronavirus， MERS-CoV）的核衣壳蛋白（ nucleocapsid，N）进行原核表达、纯化和鉴定，了解其免疫原性。方法通过人工合成N基因，构建重组质粒pET30a-MERS-CoV-N，然后转化E．coli BL21（DE3），利用 IPTG进行诱导表达，并优化确定表达条件；采用镍柱亲和层析纯化，SDS-PAGE和Western blot验证。结果原核表达成功并纯化获得与预期大小（46×103）一致的高纯度可溶性N蛋白。 Western blot表明重组蛋白可与免疫阳性兔血清及His标签抗体发生特异性反应，但与北京地区2008年收集的30份成人血清无反应。结论 MERS-CoV的N蛋白成功在原核系统中实现表达并纯化、鉴定，为MERS-CoV的免疫学诊断和免疫原性研究奠定了基础。

关键词：中东呼吸综合征冠状病毒、核衣壳蛋白、原核表达、纯化、鉴定

分类号：S85;R73

资助基金：传染病防治重大专项2014ZX10004001-002，2013ZX10004-101

在线出版日期：2014-11-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：764-769