人3型腺病毒衣壳六邻体嵌合乙肝病毒preS1双抗原表位重组体的构建及其抗原性的初步鉴定

摘要：

目的：通过构建在六邻体中嵌合表达乙肝病毒表面抗原preS1上两个中和抗原表位的人3型重组腺病毒，鉴定应用此策略所展示表位的抗原性。方法利用overlap PCR技术扩增出在HVR1和HVR2中分别引入乙肝病毒表面抗原中和表位KR359和KR127的嵌合六邻体基因，酶切后连接入穿梭质粒pBR322-L/R，然后与骨架质粒pBRAdΔE3GFP共转化至BJ5183中重组，得到阳性克隆pBRAdΔE3GFP-preS1。将其线性化后转染293细胞拯救病毒，再大量扩增并纯化。同时应用表达载体pGEX-4T3表达融合蛋白GST-KR359KR127，将重组病毒和GST融合蛋白分别免疫BALB/c小鼠获得多抗血清。 ELISA、Western blot实验鉴定嵌合表位的抗原特性。结果人3型腺病毒载体成功的在衣壳六邻体表面展示了乙肝病毒表面抗原中和表位KR359和KR127，并且诱导产生的多抗血清能识别GST融合表达抗原以及天然的乙肝病毒表面抗原。结论衣壳融合策略置换高变区来展示外源中和表位的方法可行，并且可以通过同时置换多个高变区来达到加强免疫效果或者多价抗原免疫保护的作用，为人3型腺病毒六邻体嵌合载体系统在疫苗研究中的应用奠定基础，同时也为新型乙肝疫苗的研制奠定基础。

关键词：人3型腺病毒、六邻体、乙型肝炎表面抗原、中和表位

分类号：R39;R73

资助基金：呼吸疾病国家重点实验室青年科学基金50300100201049001

在线出版日期：2014-07-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：465-470