人A组轮状病毒结构蛋白VP8的卵黄抗体制备与活性检测

摘要：

目的：制备人A组轮状病毒VP4结构蛋白N端的刺突蛋白VP8卵黄抗体IgY，并检测其生物学特征。方法以轮状病毒VP4基因的DNA为模板，采用PCR方法扩增VP8 DNA序列。将VP8片段克隆到原核表达载体 pET28a 上，形成重组质粒pET28a-VP8，转化基因工程菌E．coli BL21，完成VP8重组蛋白的诱导表达。 VP8包涵体蛋白经纯化和蛋白复性后，与弗氏佐剂混匀免疫产蛋鸡，收集鸡蛋，用水稀释-超滤法纯化卵黄抗体IgY。通过SDS-PAGE、Western blot、ELISA和点杂交等技术方法，分析该抗体的生物学特性，包括抗体的纯度、滴度、特异性和稳定性。结果 VP8在基因工程菌E．coli BL21中主要以包涵体蛋白形式表达，相对分子质量约为35×103，在pH8．0的Tris-HCl缓冲体系其复性效率可达90％。将重组抗原VP8免疫产蛋鸡，获得VP8抗原特异性的卵黄抗体IgY，抗体滴度达到1∶100000，且特异性地识别野生型A组轮状病毒。结论本研究采用基因工程和免疫技术制备的VP8卵黄抗体IgY，具有较高的抗体滴度和特异性，为婴幼儿轮状病毒感染性腹泻的诊断和防治提供了新的思路。

关键词：腹泻、人A组轮状病毒、VP8、卵黄抗体

分类号：S76;P7

资助基金：四川省教育厅重点项目08ZA086，12ZA266；四川理工学院人才工程项目2011RC16；国家级大学生创新基金项目201210622002；新疆生物资源基因工程教育部重点实验室开发课题XJDX 0201-2014-01

在线出版日期：2014-06-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：310-314