应用套式PCR提高肺炎支原体P1-RFLP基因分型检测敏感性

摘要：

目的 探索一种适用于临床标本检测的肺炎支原体套式PCR-P1-RFLP基因分型方法并对其应用进行评价.方法 参考肺炎支原体标准株P1基因RepMp4及RepMp2/3序列,分别在两个序列内部设计4条内套引物,采用文献报道的外套引物及新设计内套引物进行套式PCR扩增,扩增产物混合后用HaeⅢ酶切,根据不同的酶切图谱结果判断其型别,同时采用测序验证;对标准株DNA及临床标本DNA倍比稀释后进行检测,验证新改良方法敏感性;收集2012年肺炎支原体感染阳性标本,采用研究新改良的方法进行分型检测并与现有方法进行比较.结果 经测序验证,以套式PCR为基础的P1-RFLP基因分型方法能够对临床标本进行很好的扩增;与现有的分型方法相比,新改良方法敏感性提高103倍,差异有统计学意义;北京地区2012年儿科肺炎支原体流行基因型为Ⅰ型.结论 套式PCR-P1-RFLP基因分型方法敏感性高,能够对临床标本进行很好的扩增.

关键词：肺炎支原体、基因分型、套式PCR、P1-限制性片段酶切长度分析

所属期刊栏目：34

分类号：R737.33;R512.62;R373.9

资助基金：北京市自然科学基金7112019

在线出版日期：2014-06-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：141-145