9型重组腺相关病毒介导 R65核酶基因体外转染人血管不同细胞的对比研究

摘要：

目的：研究9型重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus 9，rAAV9）载体介导R65核酶基因及增强型绿色荧光蛋白（ enhanced green fluorescent protein ，EGFP）对体外培养人脐静脉内皮细胞（ human umbilical vein endothelial cells ， HUVECs ）、人主动脉平滑肌细胞（ human aortic smooth muscle cells ， HASMCs）的转染及病毒载体对两种不同细胞的增殖情况和对NF-κB通道P65表达的影响。方法 rAAV9-EGFP-R65按转染复数（multiplicity of infection，MOI）为1×105、1×106、1×107转染HUVECS、HASMCS细胞，倒置荧光显微镜下观察 HUVECs、HASMCs 细胞中EGFP 的表达，流式细胞仪检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs、HASMCs细胞的转染效率，Alamar Blue 检测rAAV9-EGFP-R65载体对HUVECS、HASMCs细胞增殖的影响。 Western blot法检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs和HASMCs两种细胞中NF-κB通道P65表达的影响。结果 rAAV9-EGFP-R65转染的荧光强度随着MOI的增加和转染时间的延长而增加。 HUVECs和HASMCs在rAAV9-EGFP-R65转染24 h后EGFP 开始表达。 HUVECs 在转染后第6天达到高峰，而HASMCs在转染后第5天达高峰。高峰表达时流式细胞术检测rAAV9-EGFP-R65对HUVECs的转染率分别为MOI＝1×105组：（1．40±1．20）％，MOI＝1×106组：（12．30±1．35）％，MOI＝1×107组：（52．80±2．05）％。rAAV9-EGFP-R65对HASMCs的转染率分别为MOI＝1×105组：（5．30±1．04）％，MOI＝1×106组：（18．30±2．24）％，MOI＝1×107组：（52．40±3．21）％。 rAAV9-EGFP-R65转染HUVECs和HASMCs细胞后，细胞生长及形态均正常，Alamar Blue法进一步检测表明HUVECs和HASMCs各细胞内转染组与未转染组之间A值差异均无统计学意义。 Western blot 法检测显示rAAV9-EGFP-R65转染HUVECs 和HASMCs 两种细胞后NF-κB通道P65的表达减弱。结论 rAAV9-EGFP-R65能够有效转染人脐静脉内皮细胞和人主动脉平滑肌细胞，对两种细胞增殖均无抑制作用，均能有效抑制两种细胞中NF-κB通道P65的表达。

关键词：腺相关病毒、核酶基因、转染、NF-κB、动脉粥样硬化

分类号：R65;R73

资助基金：国家自然科学基金项目81160042；教育部新世纪优秀人才计划NCET-11-1074

在线出版日期：2014-01-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：938-942