GⅡ.4型诺如病毒GZ121株P蛋白的表达及其结合HBGA受体特征

摘要：

目的 建立我国流行优势株GⅡ.4型诺如病毒(GZ121)P蛋白(包括P颗粒和P二聚体)的原核表达系统,并明确其结合HBGAs受体的能力和方式.方法 从GⅡ.4型诺如病毒GZ121株基因组中克隆P区域基因片段,通过构建P区域氨基酸序列进化树,确定其基因簇.构建含铰链Hinge-P和不含铰链P-CDCRGDCFC的pGEX4T-1原核表达质粒,将构建的原核表达载体导入大肠杆菌(E coliBL21,用0.6 mmol/L IPTG(isoProPylthio-β-D-galaetoside)过夜诱导P颗粒(不含铰链)和P二聚体(含铰链)在BL21中表达.目的重组蛋白经溶血酶酶切和FPLC鉴定分析,用EIA法检测P颗粒和P二聚体与HBGAs的结合特征.结果 GZ121株诺如病毒为GⅡ.4基因型2004簇(GⅡ.4/2004 cluster).SDS-PAGE分析确定P颗粒和P二聚体相对分子质量(Mr)约为36×103,大小与报道相符.重组P颗粒经FPLC证实,其在Mr约为830×103处形成特异的P颗粒波峰,Western blot技术证实了重组P蛋白的特异性.EIA分析结果表明,GZ121株P蛋白与A、B、O型唾液均能结合,与非分泌型唾液不结合,而P颗粒结合HBGAs受体能力是P二聚体的80～ 100倍,与96簇VA387 P颗粒相比,其结合O型能力增强,而结合A型能力稍弱.结论 我国优势流行株GⅡ.4型诺如病毒P蛋白的表达成功及其与HBGAs受体结合模型的建立,为今后研究我国诺如病毒的流行进化规律及疫苗的开发研究奠定了实验基础.

关键词：诺如病毒、原核表达系统、P颗粒、P二聚体、HBGAs受体

所属期刊栏目：33

分类号：R378.911;H314.2;H146.2

资助基金：国家自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研基金新教师类;广东省医学科研基金

在线出版日期：2013-06-19（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：270-275