10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.12.001
高糖预处理影响单核细胞对热灭活金黄色葡萄球菌刺激的反应
目的 观察高糖状态下热灭活金黄色葡萄球菌(HKSA)诱导的人单核细胞株THP-1凋亡特点,以及表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素(IL)-1β mRNA和IL-1β蛋白分泌规律.方法 体外培养THP-1单核细胞,分别以5.5 mmol/L葡萄糖(LG)和25.0 mmol/L葡萄糖(HG)培养12h~8d.将HG和LG培养6d的单核细胞加入HKSA.分别于HKSA加入前和加入后2~48 h提取单核细胞,检测细胞凋亡、IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达.细胞凋亡采用Annexin V与PI双染法,流式细胞技术检测;IL-1β蛋白分泌采用ELISA法检测;提取细胞总RNA,反转录生成cDNA后采用实时定量逆转录聚合酶链反应(real-time quantitative PCR)法,检测iNOS和IL-1β mRNA表达情况.结果 (1)高糖刺激THP-1单核细胞12 ~48 h后IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达较刺激前显著增加(P<0.05),iNOS和IL-1β mRNA表达在24 h达最高值,IL-1β蛋白分泌48 h达高峰.细胞凋亡在高糖刺激48 h~4 d较刺激前显著增加(P<0.05).(2)两组细胞加入HKSA后6~48 h表达iNOS和L-1β显著高于刺激前(P<0.01),24h达高峰,48 h表达下降;IL-1β蛋白分泌在48 h达最高值.两组细胞凋亡率在加入HKSA后12h、24h、48 h逐渐增加(P<0.01).单核细胞加入HKSA前和加入HKSA后12h,高糖组与低糖组比较,高糖组IL-1β蛋白、iNOS和IL-1β mRNA表达均低于低糖组,凋亡率高于低糖组(P<0.05).结论 高糖和HKSA对单核细胞分泌IL-1β蛋白、表达iNOS和IL-1β mRNA的影响与刺激时间有关;单核细胞处于持续高糖状态时,高糖可以增加细胞凋亡率,降低IL-1β蛋白分泌、iNOS和IL-1β表达.
高糖、单核细胞、热灭活金黄色葡萄球菌、凋亡、iNOS、IL-1β
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R735.2;R657.3;R459.3
国家自然科学基金81072817
2013-03-26(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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1005-1010