10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2012.05.009
白黎芦醇体外抑制水痘-带状疱疹病毒作用机制的研究
目的 应用构建的水痘-带状疱疹病毒(VZV)报告细胞系MV9G进一步研究白黎芦醇体外抑制VZV的作用机制.方法 将无细胞VZV直接感染MV9G细胞(CFVs直接感染)或将带细胞VZV与MV9G细胞共培养(CAVs共培养)以激发MV9G细胞表达报告基因萤火虫荧光素酶.在CFVs直接感染前或CAVs共培养不同时间点加入白黎芦醇,通过比较药物对CFVs或CAVs激发荧光素酶的抑制强度分析白黎芦醇直接灭活病毒、抑制病毒黏附和穿透、抑制病毒在细胞内复制及其时间点和可逆性:通过比较药物作用前后VZV即刻早期蛋白62(IE62)mRNA拷贝数和IE62表达强度变化分析白黎芦醇对IE62转录和表达的抑制作用.结果 白黎芦醇>30.0 μg/ml时MV9G细胞三磷酸腺苷(ATPs)含量随药物浓度升高而逐渐降低,ATPs降低50%时白黎芦醇浓度(CD.)约60.3μg/ml.CFVs与白黎芦醇(25.0μg/ml)预混37℃水浴孵育2h后直接感染MV9G细胞,CFVs激发荧光素酶下降50%.MV9G细胞在含白黎芦醇培养基中37℃孵育2h后直接感染CFVs,CFVs激发荧光素酶随药物浓度升高而逐渐降低,但4℃孵育对无显著变化.在CAVs共培养中加入白黎芦醇后CAVs激发荧光素酶显著降低,药物抑制荧光素酶50%时浓度(IC.)约8.7 μg/ml.分别在CAVs共培养3、6、9、12、24、30和36 h时加入白黎芦醇,3~24h加药各组CAVs激发荧光素酶均显著高于对照组,但1h、3D h和36 h加药组与对照组间差异无统计学意义.CAVs共培养时撤除白黎芦醇后CAVs激发荧光素酶显著高于撤药前,尤以24h和72 h撤药组明显.VZV IE62 mRNA拷贝数和IE62抗体阳性细胞数随药物作用时间延长而逐渐降低.结论 白黎芦醇细胞毒性较强,MV9G细胞可耐受最高浓度为30.0μg/ml.白黎芦醇部分灭活CFVs、抑制CFVs穿透MV9G细胞但对CFVs黏附MV9G细胞无影响,以浓度依赖方式可逆性抑制CAVs细胞内复制.白黎芦醇可能通过抑制1E62基因的转录和表达而抑制VZV感染的早期阶段.
白黎芦醇、抗病毒、水痘-带状疱疹病毒、即刻早期蛋白62
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R752.12(皮肤病学与性病学)
国家自然科学基金资助项目30671884.30840070;福建省高校新世纪优秀人才支持计划资助项目闽教科2007年20号;厦门市卫生局医学科研基金资助项目WSK0618
2012-10-29(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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