人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究

摘要：

目的 研究人乳头瘤病毒(HPV)次要衣壳蛋白(L2)在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2(1～200)肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2(1～200).将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21(DF3)中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2(1～200)融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)纯化的HPV16 L2(1～200)融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2(1～200)的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2(1～200),含有HPV16 L2(1～200)的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量(Mr)约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义(P均＜0.001),而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应.

关键词：人乳头瘤病毒、次要衣壳蛋白、同源性、交叉反应

所属期刊栏目：30

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30671882

在线出版日期：2010-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：848-852