创伤弧菌溶细胞素融合蛋白对人Caco-2细胞IL-8基因表达和IL-8分泌的影响

摘要：

目的 研究创伤弧菌溶细胞素融合蛋白(rVvhA)对人肠上皮细胞(human intestinalepithelial cell,Caco-2)IL-8基因表达的影响.方法 IPTG诱导、表达、纯化、复性及Western blot鉴定rVvhA表达和纯化情况;CCK-8法检测rVvhA对Caco-2的细胞毒性作用;RT-PCR检测rVvhA诱导Caco-2细胞IL-8基因的表达情况;ELISA检测Caco-2细胞培养上清IL-8的分泌情况.结果 Ni~(2+)-NTA亲和层析柱对rVvhA进行纯化后纯度可达95%以上;CCK-8结果显示rVvhA活性蛋白显著降低了Caco-2细胞的存活率,有效浓度为1.5 HU/ml(P<0.05);RT-PCR结果显示,0.6 HU/ml rVvhA30 minllp可诱导Caco-2细胞IL-8 mRNA基因表达上调;ELISA结果显示,Caco-2细胞经rVvhA作用后,培养液上清中IL-8多肽的表达时相在4 h.RT-PCR与ELISA结果皆显示,IL-8基因的转录及IL-8表达皆具有时间-剂量依赖性.结论 rVvhA在转录水平上能诱导人Caco-2细胞IL-8 mRNA表达,促进IL-8的合成,在创伤弧菌引起的过度炎症反应和败血症的发生、发展中可能具有重要意义.

关键词：创伤弧菌、溶细胞素、人Caco-2细胞、IL-8

所属期刊栏目：30

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金X205004;浙江省科技计划项目2008C33059

在线出版日期：2010-04-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：60-65