JC病毒VLP-Z的制备及其生物活性鉴定

摘要：

目的 利用先期重组的原核表达质粒pET15b-VP1-Z体外表达重组的蛋白VP1-Z;研究VP1-Z是否组装成VLP-Z,以及VLP-z是否具有与野生型VLP相同的生物学活性.方法 重组质粒pET15b-VP1-Z转染大肠杆菌BL21(DB),IPTG诱导重组蛋白VP1-Z表达;按照野生型VLP的制备方法纯化蛋白;Western blot和考马斯亮蓝染色确定纯化蛋白及其纯度;电镜观察VLP-Z是否形成病毒样颗粒;血凝抑制试验检测VLP-Z是否具有血凝抑制活性;细胞免疫荧光检测VLP-Z能否转运进入细胞.结果 超速离心法得到纯度及浓度较高的重组蛋白VLP-Z,其相对分子质量约50×10~3;电镜观察发现VLP-Z组装成病毒样颗粒,直径约45～50 nm,较野生型VLP直径稍大;血凝抑制试验证实VLP-Z可以抑制人"O"型红细胞聚集;细胞免疫荧光显示,感染后VLP-Z可以转运进入HeLa细胞质及细胞核,与野生型VLP感染后相同.结论 成功制备了VLP-Z,且VLP-Z具有与野生型VLP相同的生物学活性.

关键词：JC病毒、病毒样颗粒、基因治疗、定向基因传递

所属期刊栏目：29

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30570630

在线出版日期：2010-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1114-1117