分枝杆菌同源可控表达系统的建立及其应用

摘要：

目的 构建分枝杆菌可控表达载体,利用其过表达结核分枝杆菌(Mycobacterium tu-berculosis,Mtb)的免疫保护性抗原,亲和层析纯化后分析免疫原性.方法 应用PCR扩增耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)乙酰胺酶编码基因启动子(pACE),构建分枝杆菌可控表达载体pMF系列;克隆Mtb嵌合抗原编码基因并用乙酰胺进行诱导表达,以Ni~(2+)亲和层析纯化重组蛋白;并用该重组嵌合抗原Ag856A2对卡介苗(BCG)免疫的小鼠脾细胞进行体外刺激,以IFN-γ酶联免疫斑点技术(ELISPOT)分析其免疫原性.结果 成功构建了分枝杆菌可控表达载体pMF系列,利用0.02%乙酰胺进行诱导可实现目标抗原在Ms中的高水平表达;同时利用引入的6×His标签可方便实现重组抗原的一步纯化,且该同源表达重组抗原可诱导更高水平IFN-γ的分泌.结论 以Ms乙酰胺酶编码基因启动子pACE为基础构建的分枝杆菌可控表达系统可实现Mtb抗原在Ms中的高水平表达与纯化,与大肠杆萧异源表达相比,该同源表达重组抗原具有更好的免疫原性.

关键词：分枝杆菌、乙酰胺酶、启动子、同源表达、可诱导表达

所属期刊栏目：29

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家重大传染病专项2008ZX10003011;上海市青年科技启明星计划09QA1405200;国家自然科学基金30901276

在线出版日期：2010-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1104-1109