16S rDNA快速鉴定血液制品中污染细菌的测序方法的建立

摘要：

目的 建立基于16S rDNA快速鉴定细菌的PeR测序方法(PCR-SBT).方法 通过一组16S rDNA通用引物扩增得到基因组全长,PCR产物经纯化后直接测序分析.利用BLAST软件从GenBank数据库中搜索相关菌株的16S rDNA全序列,采用Clustal X软件进行多序列比对和同源性分析,确定细菌的种属,并与常规生化鉴定结果比较.利用大肠杆菌基因组一系列稀释度标本进行PeR扩增,检测方法的敏感性.结果 实验利用多对引物建立了16S rDNA全长序列分析方法,13个标准菌株通过PCR-SBT方法获得约1400 bp的全长序列.比对分析13个标准菌株测序结果与预期标准序列完全一致,证实建立的PCR-SBT方法结果可靠.利用建立的PCR-SBT法,对实验室从血小板制品和脐带血中分离得到不同未知菌株进行鉴定,成功确定了这些菌株的种属.以大肠杆菌DNA为模板,方法的最低检测限为反应体系DNA含量0.2 ng.结论 建立的基于16S rDNA的PCR-SBT方法是可行的,可快速准确地检测及鉴定细菌种类,尽早发现细菌污染血制品,对污染血制品输注后的针对性治疗方面具有潜在的应用价值.

关键词：血液细菌污染、16S rDNA、多聚酶链反应.测序方法

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资助基金：浙江省科技厅重大疾病防治项目2006C13111

在线出版日期：2009-12-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：880-883