检测T-bet表达活性的荧光素酶报告基因质粒的构建和鉴定

摘要：

目的 构建一个能应用于T-bet转录活性研究和大规模筛选的报告基因质粒.方法 以IFN-γ基因的CNS-22 T box结合位点序列为基础,人工合成顺式元件DNA(TbRE),重组连接到报告基因载体pLUC-MCS中.经测序验证后,转染293T细胞检测报告基因对T-bet的响应,并通过电泳迁移率检测(EMSA)证实T-bet与TbRE元件的特异结合.结果 成功构建了TbRE-LUC报告基因质粒.经荧光素酶活性检测证实外源表达的T-bet对报告基因的表达可以有20倍左右的激活,并且存在剂量效应,T-bet的表达量与报告基因的表达水平呈正相关.经电泳迁移率检测验证,T-bet可以与TbRE顺式反应元件特异性结合.结论 成功构建了T-bet转录活性相关的报告基因质粒TbRE-Luc,该报告基因系统反应灵敏,特异性强,可用于大规模筛选T-bet转录调控相关基因.

关键词：报告基因、T-bet、电泳迁移率检测

所属期刊栏目：29

分类号：R4(临床医学)

资助基金：国家高技术研究发展计划专项经费资助项目2006AA02A305

在线出版日期：2009-08-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：650-655