HBVnt453-250负性调节元件作用方式与嗜肝性的研究

摘要：

目的 HBVnt453-250序列为乙型肝炎病毒正链的一个新的负性调节元件,探讨其作用方式是否具有方向位点依赖性、启动子选择性以及肝细胞特异性.方法 构建含有负性调节元件的质粒pHBV453-250方向和位点置换体(pHBV250-453、plucHBV453-250和plucHBV250-453),分别以荧光素酶(luciferase)及增强型绿色荧光蛋白(EGFP)作为报告基因,转染HepG2细胞后,通过双荧光素酶体系、荧光定量PCR和Western blot分析,检测HBVnt453-250序列对目的基因转录及表达的影响;构建启动子置换的质粒pCMV453-250(luc),转染HepG2细胞后,双荧光素酶检测系统检测荧光素酶表达;将pHBV453-250和pHBV250-453分别转染人宫颈癌细胞(HeLa)和人肺癌细胞(A549),双荧光素酶检测系统检测荧光素酶表达.结果 HBVnt453-250序列以正向或反向插入荧光素酶或EGFP基因的5'端或3'端时,均能表现对目的基因转录和表达的下调作用;在CMV启动子引导下,HBVnt453-250序列明显降低了荧光素酶的活性,为对照的36.56%;正反向的HBVnt453-250序列均能在两种非肝源性细胞系中抑制荧光素酶活性.结论 HBVnt453-250序列的负性调节作用无方向及位点特异性,无启动子选择性及肝细胞特异性.

关键词：乙型肝炎病毒、正链、负性调节元件、嗜肝性

所属期刊栏目：29

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30600520

在线出版日期：2009-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：16-23