原核表达、稀释复性的人FcγR Ⅱ a恢复IgG的结合功能

摘要：

目的 探讨原核表达稀释复性的可溶性人FcγR Ⅱ a(shuFcγRⅡa)的胞外区蛋白在体外与配体的结合活性.方法 应用PCR技术从重组质粒pc3huR Ⅱ中扩增huFcγR Ⅱ a的胞外区基因,将其克隆于原核表达载体pET-28a中.所构建的重组质粒经PCR和酶切鉴定后转化大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导表达,制备融合蛋白包涵体.并采用多次洗涤法分离和纯化包涵体,用稀释法对纯化后的目的 蛋白进行复性,ELISA和流式细胞术测定重组shuRⅡ在体外与配体的结合活性.结果 扩增到了huFcγRⅡa的胞外区基因,所构建的pETshuRⅡ重组质粒经PCR和酶切鉴定与设计序列一致.转化BL21(DE3)后,IPTG诱导目的 蛋白表达率约为30%.SDS-PAGE初步测定目的 蛋白的相对分子质量(Mr)约为24.8×103,与理论预期值一致.破菌后电泳证实目的 蛋白主要以包涵体形式表达,经多次洗涤后蛋白纯度大于90%.ELISA法测得重组shuRⅡ与人IgG在体外有良好的结合活性,流式细胞术测得重组shuRⅡ对配体与受体结合有抑制作用.结论 本复性方法可得到和天然蛋白类似生物学活性的目的 蛋白.

关键词：shuRⅡ蛋白、原核表达、复性

所属期刊栏目：28

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30730068

在线出版日期：2009-03-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1059-1063