北京地区不同基因型Noro病毒的主要衣壳蛋白在大肠杆菌中的表达

摘要：

目的 对北京地区的不同基因型Noro病毒的主要衣壳蛋白(VP1)进行表达,得到Noro病毒抗原,为对Noro病毒做进一步的深入研究打下基础.方法 用PCR分别从先前研究得到的含北京Noro病毒主要衣壳蛋白VP1编码基因的重组质粒pBST-CR2987(G Ⅱ-3)及pBST-CR2932(G Ⅱ-4)中扩增得到VP1全基因,然后将目的基因亚克隆到表达载体pET-30a(+)中,得到重组质粒,转化BL21(DE3)感受态细胞,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达.通过SDS-PAGE和Western blot检测蛋白的表达和抗原性,并对表达产物进行了纯化.结果 (1)双酶切和测序证明得到了VP1的重组表达载体.CR2987 VP1基因全长1647 bp,含编码549个氨基酸的单一的开放读码框架(ORF);CR2932 VP1基因全长1623 bp,含编码541个氨基酸的单一的ORF.(2)重组表达的VP1主要以包涵体的形式存在,在诱导后4～6 h表达量最高.(3)重组表达的VP1能够被豚鼠抗Noro病毒VP1的特异性免疫血清及鼠抗His标签的抗体所识别.(4)纯化后的蛋白能够为人血清所识别.结论 GⅡ-3型及GⅡ-4型Noro病毒北京地方株的VP1在原核体系中获得表达,表达的VP1可以被特异性免疫血清及人血清所识别,说明其具有抗原活性.

关键词：Noro病毒、VP1蛋白表达、原核表达、抗原性

所属期刊栏目：28

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30270067

在线出版日期：2008-05-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：144-148