沙眼衣原体主要外膜蛋白T、B细胞多表位基因的表达及其鉴定

摘要：

目的 对沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位进行预测和选择,并进行Ct MOMP多表位基因克隆和多表位蛋白的原核表达及其抗原性分析,为研制多表位Ct疫苗提供基础资料.方法 利用SYFPEITHI法和多项式方案结合预测HLA-A2限制性的CtMOMP的CTL表位,选取含多个CTL表位的基因片段作为目的基因,兼顾目的基因上下游存在的TH和B细胞表位的基因,共同组成含CTL、TH和B细胞表位的多表位基因.多表位基因经密码子优化后进行全序列合成,克隆入原核表达载体pET-32a(+),经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)表达并纯化,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物.结果 经预测筛选得到了多个MOMP HLA-A2限制性的CTL表位,成功克隆了含CTL、TH、B表位的MOMP多表位基因,并在大肠杆菌中获得了高效表达.表达产物的相对分子质量(Mr)约24×103,与预期Mr相符,并用Western blot方法初步证实多表位蛋白有抗原特异性.结论 成功设计了Ct MOMP的T、B细胞多表位基因,并证实在原核表达系统中获得正确表达的多表位蛋白具有良好的抗原性.

关键词：沙眼衣原体、主要外膜蛋白、表位、表达

所属期刊栏目：27

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30271191;浙江省自然科学基金Y205659;浙江省卫生医药卫生重点科技项目2005ZD011

在线出版日期：2007-08-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：536-539