B族链球菌C5a肽酶蛋白表位的克隆、表达和免疫学分析

摘要：

目的 应用生物信息学方法预测B族链球菌C5a肽酶蛋白表位,结合基因工程手段进行表位重组、表达和免疫原性分析.方法 用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测B族链球菌C5a肽酶蛋白的表位,应用PCR技术扩增出编码该表位基因片段,克隆PCR产物构建重组质粒,测序验证.在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达融合蛋白.表达的蛋白经质谱分析和Western blot鉴定.纯化该融合蛋白并免疫C57/BL小鼠,萃取GBS表面蛋白,双向琼脂扩散试验检测抗体水平.结果 在SCPB中预测到1个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段.重组和表达了这一肽段,质谱得出与SCPB蛋白的相似性分数为79,Western blot证实能与抗SCPB的抗体反应,纯化后融合蛋白纯度＞90%.动物实验证实融合蛋白能产生特异性的抗GBS抗体.结论 重组表位具有一定免疫原性,为相关蛋白的毒力机制研究和亚单位疫苗等方面的研究打下了良好的基础.

关键词：链球菌计算机预测、C5a肽酶、抗原表位、融合蛋白表达、免疫原性

所属期刊栏目：26

分类号：R3(基础医学)

资助基金：国家自然科学基金30371487

在线出版日期：2007-03-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1080-1084