分泌型PD-L1真核表达载体的构建、表达及其体外效应的初步研究

摘要：

目的 构建分泌型PD-L1真核表达载体,并对其生物学活性进行初步研究.方法 以RT-PCR方法从孕鼠胎盘中获得程序性死亡因子-1(programmed death-1,PD-1)配体PD-L1的胞外段基因片段,定向连接于pcDNA3.1上构建真核表达载体pcDNA-PDL1;用脂质体将重组子导入NIT细胞,转染后的NIT命名为NITp.以Western blot鉴定重组蛋白的表达.MTT比色法检测NITp细胞培养上清对同种混合淋巴细胞培养反应的影响;用ELISA试剂盒检测NITp细胞培养上清对反应性T细胞分泌的细胞因子的影响.结果 RT-PCR得到约730bp目的基因片段,测序结果显示该目的基因与Gen-Bank上的序列相符;Western blot分析提示NITp分泌性表达目的蛋白;NITp培养上清可抑制混合淋巴细胞增殖,其效应呈剂量依赖性;反应性T细胞分泌的细胞因子检测结果显示,培养上清中IL-4、IFN-γ、IL-2水平降低,与正常对照组差异有统计学意义.结论 成功构建PD-L1基因真核表达载体pcDNA-PDL1,PD-L1蛋白对同种细胞刺激的增殖反应有抑制作用,并可在一定程度上抑制特异性T细胞的活化.

关键词：PD-L1、混合淋巴细胞培养、细胞因子、1型糖尿病

所属期刊栏目：26

分类号：R3(基础医学)

资助基金：暨南大学校科研和教改项目51205072;广东省医学科学技术研究基金A2006335

在线出版日期：2006-12-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1009-1012