编码AFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗诱导小鼠抗肿瘤免疫的研究

摘要：

目的构建能够表达AFP和CTLA4融合蛋白的DNA疫苗并检测其诱导特异性CTL反应及抗产生AFP肿瘤的能力.方法利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中克隆mAFP基因.连接mAFP基因和编码小鼠CTLA4膜外部分的基因构建质粒DNA疫苗.对此疫苗进行酶切、测序和表达鉴定.用pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞系.以此DNA疫苗免疫小鼠,用ELISPOT检测免疫后小鼠脾脏细胞中产生IFN-γ的细胞频数.以EL-4(mAFP)肿瘤细胞攻击免疫后小鼠,观察肿瘤的生长情况.另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测.结果利用RT-PCR从Hepa1-6细胞总RNA中成功克隆出1.8kb的mAFP基因.酶切、测序和表达鉴定证实编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗构建成功.RT-PCR证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA的表达.ELISPOT检测结果显示:pmAFP-CTLA4免疫组产生IFN-γ的细胞频数显著高于pmAFP组、pcDNA3.1组和PBS组.pmAFP-CTLA4免疫组小鼠的肿瘤体积为(385.93±52.9)mm3,明显小于pmAFP组(1042.42±123.71)mm3、pcD-NA3.1组(2292.38±276.94)mm3和PBS组(2303.5±233.13)mm3,P均＜0.01.各组肝、肾功能差异无统计学意义.结论编码mAFP-CTLA4融合蛋白的DNA疫苗能诱导产生AFP特异性的CTL增殖并诱导小鼠产生明显的抗肿瘤免疫力,此疫苗对小鼠肝、肾功能不产生影响.

关键词：甲胎蛋白、基因治疗、免疫治疗、癌、肝细胞

所属期刊栏目：26

分类号：R73(肿瘤学)

在线出版日期：2006-07-31（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：504-507