变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因失活菌株的构建和鉴定

摘要：

目的利用基因打靶技术构建变异链球菌葡聚糖结合蛋白D基因(gbpD)失活株,用于葡聚糖结合蛋白D基因功能的研究.方法体外培养变异链球菌UA159菌株并以其基因组为模板,对gbpD基因内部序列进行PCR扩增,连接自杀载体pVA8912,分别用酶切及PCR鉴定;转化变异链球菌UA159株,用PCR及Western blot鉴定.结果经鉴定PCR产物及插入片段大小与预期值相符,且为所需目的基因片段,成功构建了自杀质粒pVA8912-gbpD;经PCR鉴定及Western blot鉴定,gbpD基因失活株基因组中gbpD基因内部成功插入目的片段,且该菌株不表达GbpD蛋白.结论成功构建了用于变异链球菌gbpD基因打靶的自杀质粒和gbpD基因失活株,为该基因功能的研究奠定了基础.

关键词：基因打靶、变异链球菌、葡聚糖结合蛋白

所属期刊栏目：26

分类号：R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家科技攻关项目2004BA720A24

在线出版日期：2006-06-13（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：409-413