抗SARS冠状病毒中和活性单克隆抗体的筛选及其结合位点分析

摘要：

目的建立能分泌具有中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体(McAb)细胞株,制备有中和活性的抗SARS-CoV McAb,用于SARS-CoV感染的早期特异诊断和进行SARS-CoV结构蛋白的功能研究.方法用灭活纯化SARS-CoV(BJ01株)免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,建立能稳定分泌SARS病毒McAb的杂交瘤细胞系,然后用中和试验进一步筛选分泌具有中和活性的抗SARS-CoVMcAb细胞株.利用SARS-CoV的S和N蛋白的不同长度肽段通过ELISA鉴定McAb的特异结合区域,分析S和N蛋白不同区域诱导产生抗体的能力和特性.结果建立了12株能稳定分泌抗SARS-CoVMcAb的杂交瘤细胞株,间接免疫荧光法检测抗体效价在1:320～1:20 480之间,其中6株具有较好的中和SARS-CoV的能力.具有中和活性的McAb中,3株是针对S蛋白的,2株是针对N蛋白的,其中抗S蛋白的中和抗体活性比抗N蛋白的中和抗体活性高,另外1株可能是针对SARS-CoV的其他结构蛋白的.进一步对6株抗S蛋白的McAb的特异抗原结合表位分析,发现其中3株结合位点在S蛋白第12～311氨基酸之间,2株在第310～535氨基酸之间,后者中和效价高于前者,另1株是针对S2蛋白的,SARS病毒的受体结合区正位于第310～535氨基酸这一区段.具有中和活性的McAb通过间接免疫荧光、ELISA、酶标免疫组化法和胶体金方法对SARS病毒进行检测,都显示出高度的特异性和良好亲和力.结论成功制备了具中和活性的抗SARS-CoV单克隆抗体,并分别测定了McAb对S蛋白和N蛋白的特异抗原结合活性,初步确定了S蛋白的中和表位.为今后SARS病毒的特异诊断、结构蛋白的功能分析和重组疫苗的研制奠定了较好的基础.

关键词：严重急性呼吸综合征、单克隆抗体、抗原表位

所属期刊栏目：26

分类号：R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2006-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：215-219