增殖诱导配体基因的克隆、表达及生物学活性分析

摘要：

目的克隆人增殖诱导配体(APRIL)基因,分析APRIL蛋白的生物学活性.方法采用RT-PCR技术,从肿瘤细胞株总RNA中克隆了APRIL全长编码基因;构建了APRIL胞外可溶性片段(sAPRIL)的原核表达载体,对表达的蛋白初步纯化后进行生物学活性检测;构建了APRIL编码区的真核表达载体,经脂质体转染转化细胞株,流式细胞仪和MTT法分析表达产物对细胞周期及细胞生长的影响.结果 sAPRIL原核表达载体经IPTG诱导后,发现在相对分子质量(Mr)20×103处有一明显的表达条带,纯化蛋白进行初步活性测定显示其可以剂量依赖方式促进细胞的生长;细胞转染实验证实APRIL能促进多种转化细胞的增殖,但对细胞周期无明显影响.结论成功克隆了人APRIL基因,并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌进行了表达;构建了APRIL真核表达载体,初步分析了APRIL的生物学活性,提示APRIL在肿瘤细胞增殖过程中可能起了重要作用,为进一步进行APRIL基因的功能研究及其临床应用奠定了实验基础.

关键词：增殖诱导配体(APRIL)、基因克隆、基因表达、转染、生物学活性分析

所属期刊栏目：25

分类号：R3(基础医学)

在线出版日期：2005-12-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：907-911