热点突变法提高人源抗TNF-α抗体的亲和力

摘要：

目的通过热点突变法对一株人源抗TNF-α ScFv进行体外亲和力成熟.方法根据体内抗体亲和力成熟时V基因体细胞突变的热点,设计引物进行多步重叠PCR,在本株ScFv的H-CDR3和L-CDR3热点部位引入随机突变,构建噬菌体抗体库,采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行筛选,对选出的克隆测定其相对亲和力,并进一步将4株转换表达成为可溶性Fab,以非竞争ELISA法测定其亲和常数.结果构建了库容为1.8×107的热点突变抗体库,筛选得到了多株亲和力明显提高的抗TNF-α抗体的突变体(最多达10倍).结论热点突变法是体外提高抗体亲和力的有效和可行的方法.

关键词：抗体库、亲和力成熟、人源抗体、TNF-α

所属期刊栏目：24

分类号：R3(基础医学)

资助基金：解放军医药卫生重点项目01Z015

在线出版日期：2004-09-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：644-648