重组主要表面抗原1用于弓形体病IgG免疫诊断的研究

摘要：

目的用纯化的重组刚地弓形虫RH株主要表面抗原1(SAG1)作为检测抗原,建立间接法rSAG1-ELISA,检测弓形虫IgG抗体并与国外进口试剂盒进行比较,以观察其阳性和阴性符合率;并对rSAG1-ELISA检测的精确度、灵敏度和特异性进行评价. 方法接种重组菌至LB肉汤中,IPTG诱导表达后,用Ni2+螯合柱进行亲和纯化;分别用不同浓度的重组抗原rSAG1包被聚苯乙烯酶标条,检测不同稀释度的阳性和阴性血清,以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG为二抗,采用正交试验确定rSAG1-ELISA的最佳检测条件;按rSAG1-ELISA法的最佳检测条件对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清重复测20次进行精确度的检测;采用抗体抑制试验检测其特异性;同时对用进口试剂盒筛得的52份弓形虫IgG阳性血清和40份弓形虫IgG阴性血清进行检测. 结果制备的rSAG1重组蛋白纯度在90%以上;以该重组抗原建立的rSAG1-ELISA的最佳检测条件为:重组抗原rSAG1的包被浓度为5μg/ml,血清稀释度1∶100,酶标记的羊抗人IgG 1∶2000稀释;用rSAG1-ELISA对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清的重复检测表明:IgG阳性血清的检测值的变异系数(CV值)为10.9%,IgG阴性血清的CV值为10.7%;灵敏度检测表明血清稀释度在1∶50～1∶200均可检出阳性;特异性试验的抑制率为62.6%;rSAG1-ELISA与进口试剂盒的总符合率为87%,其中阳性和阴性符合率分别为81%(42/52)和95%(38/40). 结论 rSAG1-ELISA具有较好的灵敏性和特异性,与进口试剂盒相比有较高的符合率,表明该法具有较好的弓形体病诊断价值,可进一步推广应用.

关键词：弓形体病、重组抗原、酶联免疫吸附试验、免疫诊断

所属期刊栏目：24

分类号：R44(诊断学)

资助基金：江苏省重点学科建设项目;江苏省重点实验室基金WK200215

在线出版日期：2004-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：245-248