人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得与鉴定

摘要：

目的获得人源中和性抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆基因工程抗体. 方法采用五轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV 患者外周血源的噬菌体抗体库.获得有特异结合活性的噬菌体抗体,酶切鉴定抗体基因插入.切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段,ELISA、Western blot检测抗体免疫学活性;测序分析抗体基因. 结果筛选出4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体,可能为中和抗体.切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性.可溶性抗体与含中和抗原表位的HEV ORF2重组混合抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应.Western blot显示在相对分子质量(Mr)略大于45×103处有一明显条带,与Mr 48×103的Fab大小一致.DNA测序分析表明,Fab段VH属于IgG VH3基因家族,VL属于Vκ1基因家族. 结论利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体.

关键词：戊型肝炎病毒、噬菌体展示、抗体库

所属期刊栏目：24

分类号：R392

资助基金：江苏省科技厅自然科学基金BK200022

在线出版日期：2004-05-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：198-201