四种hGM-CSF/IL-6融合蛋白的基因构建、表达及活性比较

摘要：

目的构建及表达具有hGM-CSF和hIL-6双重生物学活性的hGM-CSF/IL-6融合蛋白分子. 方法应用PCR技术对hGM-CSF和hIL-6的基因分别加以改造,同时在二者之间加上连接肽序列(G-G-S-G-S)3,克隆PCR产物,并构建成克隆有4种融合蛋白基因的pBV220表达质粒,4种融合蛋白分别是GM-CSF(9～127)-IL-6(29～184)(简称GI1)、GM-CSF(9～127)-IL-6(1～184)(简称GI2)、GM-CSF(1～127)-IL-6(1～184)(简称GI3)、GM-CSF(9～127)-IL-6(24～184)(简称GI4),表达质粒分别导入E.coli BL-21中诱导表达.通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化以获取目的蛋白.使用hGM-CSF依赖细胞株TF1和hIL-6依赖细胞株B9通过MTT法测量融合蛋白的生物学活性. 结果对4种融合蛋白基因的测序结果表明,其序列与理论设计完全一致,表达质粒在E.coli BL-21中均得到高效表达,表达的融合蛋白均占到总蛋白含量的30%以上,表达产物以包涵体的形式存在,通过Q Sepharose HP离子交换柱和 Sephacryl S-200分子筛柱二步柱纯化及复性后获得4种目的蛋白,其纯度均达到95%以上.活性测定结果表明4种融合蛋白均具有较高的hGM-CSF和hIL-6的双重生物学活性. 结论获得了具有较高纯度和双重生物学活性的GM-CSF/IL-6融合蛋白.

关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、白细胞介素-6、融合蛋白、克隆、基因表达

所属期刊栏目：24

分类号：R392

资助基金：云南省自然科学基金2001C0031Q

在线出版日期：2004-03-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：128-133