FKBP12/BAX双聚体诱导细胞凋亡模型的建立

摘要：

目的建立FKBP12/BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型,并利用阳性药物对其进行鉴定.方法RT-PCR扩增鼠源性BAX全长基因,插入pUC18载体进行测序鉴定.将鉴定正确的mBAX插入载体pC4FV1E中,构建pC4FV1E/BAX表达质粒.将表达质粒与pcDNA3.1共转染HEK293细胞,建立pC4FV1E/BAX-neo和neo基因稳定表达的细胞模型.利用形态学方法、流式细胞术等对化学药物诱导FKBP12/BAX双聚体介导的细胞凋亡进行定性及定量的分析.结果RT-PCR、Western blot法分别从mRNA及蛋白水平检测到FKBP12-mBAX融合基因的整合及表达;阳性化合物AP20187作用4～6 h后,Giemsa染色可见明显的凋亡小体;钙依赖核酸内切酶亦被激活,出现典型的"DNA ladder";天然产物FK506可竞争性地抑制这种阳性药物诱导的细胞凋亡.结论FKBP12/BAX双聚体可诱导细胞凋亡生物效应的细胞模型的建立,为FK506类小分子化合药物的高通量筛选提供可应用的技术平台.

关键词：共转染、融合表达、细胞模型、细胞凋亡、竞争抑制

所属期刊栏目：23

分类号：R392

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2003CB515508

在线出版日期：2004-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：955-960