以CⅡTA-pⅠ作为树突状细胞特异启动子构建腺病毒双表达载体

摘要：

目的构建CⅡTA-pⅠ启动子特异调控的鼠TGF-β1和PLP-Ig重组双表达载体,以期达到在树突状细胞中特异表达. 方法从鼠外周血单个核细胞克隆CⅡTA-pⅠ启动子,从ConA刺激的小鼠脾单个核细胞和WT-1杂交瘤细胞克隆TGF-β1基因和Ig重链Fc基因;体外经IRES序列连接后,通过穿梭载体与腺病毒载体骨架连接,鉴定后在HEK293包装.从小鼠骨髓造血细胞培养树突状细胞.流式细胞仪检测树突状细胞CD80、CD54和Ⅰ-Ad的表达,鉴定树突状细胞的成熟度和纯度.病毒转染后,采用ELISA方法鉴定该病毒在树突状细胞中TGF-β1基因的表达水平;Western blot鉴定PLP-Ig的表达. 结果该双表达重组腺病毒载体经测序、限制性内切酶分析、PCR等鉴定,与预期结果一致;病毒感染树突状细胞的培养上清液和细胞分别经ELISA和Western blot检测证实TGF-β1和PLP-Ig得到了独立表达,在HEK293细胞中则无表达,并随树突状细胞的成熟,表达量逐渐增高. 结论以CⅡTA-pⅠ作为树突状细胞特异启动子构建的重组腺病毒双表达载体,在树突状细胞中得到了特异、独立的表达,为靶向树突状细胞表达功能基因进行基因治疗奠定了基础.

关键词：树突状细胞、转化生长因子β、腺病毒载体、启动子

所属期刊栏目：23

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金39970270

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：562-566