恙虫病东方体Sta56抗原的原核表达、纯化及其在间接ELISA中的应用

摘要：

目的构建含恙虫病东方体sta56基因的重组表达质粒,在E.coli中表达Sta56重组抗原,纯化后用于间接ELISA检测恙虫病. 方法从含有恙虫病东方体Karp株sta56基因的重组质粒TOPO-sta56扩增出截短的sta56,定向插入pET30a载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,用SDS-PAGE及Western blot进行分析;采用电洗脱方法纯化重组抗原并应用于间接ELISA检测恙虫病. 结果以截短的sta56基因片段构建了重组表达质粒pETOt957,重组的Sta56抗原可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,SDS-PAGE显示了一条相对分子质量(Mr)为40.3×103的蛋白表达带,Western blot证实该融合蛋白能被恙虫病患者阳性血清所识别.电洗脱纯化的重组抗原应用于间接法ELISA检测恙虫病,与间接免疫荧光法IFAT比较,其敏感性和特异性分别为91.7%和76.5%. 结论在大肠杆菌中表达的Sta56重组抗原具有免疫反应性,纯化后可用作免疫诊断试剂.

关键词：恙虫病东方体、Sta56抗原、蛋白表达、蛋白纯化、间接ELISA

所属期刊栏目：23

分类号：R3(基础医学)

资助基金：福建省卫生厅青年科研项目2001-1-25

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：397-400