人B细胞活化相关基因BC-1514全长cDNA的克隆与原核表达

摘要：

目的克隆与B细胞活化相关的新基因及其原核表达. 方法采用差异显示反转录PCR(DDRT-PCR)技术对人扁桃体活化和静止B细胞mRNA的差异表达进行分析,差异显示的片段经过Northern杂交验证后,作为探针进行人活化B细胞cDNA文库的筛选.将所获得的阳性克隆的编码区经PCR扩增后克隆到原核表达载体pGEX-5X-1中,重组质粒经酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL-21,以IPTG诱导表达融合蛋白. 结果以在活化B细胞高表达的EST32为探针,经3轮筛选人活化B细胞文库获得一个新的全长为1?514bp的cDNA克隆(命名为BC-1514).重组的BC-1514蛋白可在E.coli中以融合蛋白的形式有效表达,其表达量约占细菌总蛋白量的14.3%左右.BC-1514 cDNA的GenBank的登录号为AF304442. 结论获得了1条新的与B细胞活化相关的cDNA克隆并在E.coli BL-21中得到了有效表达.

关键词：差异显示、B淋巴细胞、原核基因表达

所属期刊栏目：21

分类号：R392

资助基金：国家攀登计划930211003

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：604-607