重组腺相关病毒转导外源基因入EB病毒转化的B淋巴细胞获长期表达

摘要：

目的采用重组腺相关病毒(AAV)载体pAGX(+),把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞,以获得正义或反义6A8 DNA长期表达的B淋巴细胞株. 方法构建含正义或反义6A8 DNA片段的重组pAGX(+)质粒.经包装后转导淋巴细胞,经G418筛选,用有限稀释法克隆转导成功的淋巴细胞.Northern杂交和RT-PCR检测转导基因的mRNA表达水平.Con A结合试验检测细胞在转导基因后6A8 α-甘露糖苷酶活性的改变. 结果 pAGX-反义6A8 DNA及pAGX-正义6A8 DNA经包装获得了高复制滴度的重组AAV(rAAV)颗粒,藉助rAAV成功地把6A8基因转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB.Northern杂交结果显示,转导的正义或反义6A8 DNA获得表达.经1年余传代培养,RT-PCR检测见BJAB和SKW6细胞中转导的正义或反义6A8 DNA的mRNA表达增加,新霉素抗性基因(neoR)也获得表达,表明转导基因获得了长期表达.Con A结合强度在转导反义6A8 DNA的细胞升高,提示转导反义6A8 DNA可影响6A8 α-甘露糖苷酶的表达. 结论用AAV载体成功地把6A8 α-甘露糖苷酶基因的正义或反义DNA片段转导入EB病毒转化的B淋巴细胞SKW6和B淋巴样白血病细胞株BJAB,转导的基因获得长期表达,并干扰6A8 α-甘露糖苷酶的表达.

关键词：腺相关病毒载体、转导、正义和反义6A8 DNA、EB病毒转化的B淋巴细胞

所属期刊栏目：21

分类号：R392

资助基金：国家自然科学基金39630300;中国医学科学院资助项目

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：594-599