利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因

摘要：

目的利用抑制消减杂交技术(SSH), 比较致病与非致病钩端螺旋体(简称钩体)之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段. 方法以赖型017株为tester,非致病性patocⅠ株为driver,选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切,连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR,得到消减混合物,与T/A克隆载体连接,转化JM109建立差异消减文库,经PCR和Southern blot筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和同源分析. 结果 AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段; 经SSH筛选鉴定得到30个片段大小为200～1?300bp的阳性克隆, 部分已测序的片段中1个与硫胺素合成蛋白高度同源,4个与GenBank无明显同源性,可能为赖型致病钩体所特有而非致病钩体缺失的基因片段,已被GenBank收录,收录号分别为 AF300873～300877. 结论 SSH是一种有效、灵敏、高特异的比较分析基因组差异的方法,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义.

关键词：钩端螺旋体、基因组差异、抑制消减杂交

所属期刊栏目：21

分类号：R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：国家自然科学基金30070670

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：574-577