液-质联用分析肝癌细胞HLA-A2类分子递呈的抗原肽

摘要：

目的寻找MHCⅠ类分子递呈的、T淋巴细胞识别的肝癌抗原肽. 方法人肝癌细胞系hHCC以枸橼酸-磷酸盐(pH3.3)液洗脱,洗脱物经粗分离,得到相对分子质量(Mr)＜5?000的各种多肽组分混合液;取各组分多肽分离液分别与抗原加工缺陷细胞(T2,HLA-A2)进行细胞表位重建,加入特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),51Cr释放法测杀伤活性;选活性值高的抗原肽组分进行反相高效液相色谱-质谱(RP-HPLC-MS)检测,对活性峰手工读谱分析其一级结构;最后进行氨基酸同源性分析. 结果酸洗1010hHCC细胞,样品蛋白质浓度2mg/ml;通过RP-HPLC-MS检测,其质谱图经手工解析,氨基酸序列为SXXVHXNEV,X=1或L;氨基酸同源性分析证明SXXVHXNEV为SLIVHLNEV,是肝细胞生长因子受体的第1?075～1?083肽段,第1?080位点发生突变,由F变为L,由HLA-A2分子递呈. 结论细胞膜温和酸洗技术结合RP-HPLC-MS联用技术,是寻找肝癌抗原肽的有效方法,尚未见相同研究报道.发现的肝癌抗原肽SLIVHLNEV是肝细胞生长因子受体的突变物,可能具有重要生物学意义.

关键词：肝肿瘤、肿瘤抗原、HLA-A2、高效液相色谱-质谱、MHCⅠ类分子

所属期刊栏目：21

分类号：r73

资助基金：国家自然科学基金39830420

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：486-489