人THANK cDNA的克隆及其在大肠杆菌中表达

摘要：

目的克隆THANK cDNA，并在大肠杆菌中进行表达。方法采用RT-PCR技术，从人外周血单个核细胞的总RNA中扩增人THANK全长编码区基因及THANK胞外区编码基因，PCR产物直接克隆于pMD-18T载体中, 重组克隆进行DNA测序。将测序证实的THANK胞外区基因亚克隆到原核表达载体pET-11a中。阳性重组子, 以1mmol/L IPTG进行诱导表达，以SDS-PAGE分析THANK胞外区的表达。对表达的蛋白作初步纯化处理后，进行生物学活性检测。结果 RT-PCR扩增出一个858bp的DNA片段，限制性内切酶图谱分析和测序结果显示，该片段为编码人THANK的cDNA，与公布的人THANK基因序列一致。将胞外区片段克隆入表达载体，转化大肠杆菌表达后发现，与阴性对照相比，在相对分子质量（Mr）26×104处多显示出一条条带。对该蛋白进行初步活性测定显示其可显著地抑制U937细胞的生长。结论本实验成功地克隆了人THANK基因，并将其可溶性胞外区片段在大肠杆菌中进行了表达，表达的重组蛋白可抑制U937细胞的生长。这为进一步进行THANK基因的功能研究及其开发和临床应用奠定了基础。

关键词：人THANK、RT-PCR、基因克隆、基因表达

所属期刊栏目：21

分类号：R37(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：460-464