来自噬菌体抗体库识别KG1a细胞的scFv5C1的高效表达、纯化及其生物学特性

摘要：

目的为深入研究源于噬菌体抗体库特定单链抗体（scFv）的功能和其识别抗原的分子特征，将识别KG1a细胞的单链抗体5C1 scFv高效表达、纯化；用scFv测定未知抗原的相对分子质量（Mr）；并研究5C1 scFv对KG1a部分细胞生物学特性的影响。方法基因重组构建表达5C1 scFv的载体pSTE-5C1，在大肠杆菌中诱导表达，金属离子螯和亲和层析法纯化，获得高纯度的活性5C1 scFv；借助生物素-链亲和素的高亲和力和高灵敏度的显色系统，用Western blot分析其识别的KG1a细胞膜蛋白的Mr；用聚集实验分析5C1 scFv对KG1a细胞同型聚集的影响。结果 5C1 scFv在大肠杆菌中获高效表达，纯化后活性蛋白产量可达每升培养物50～60mg，纯度大于95%；成功地测定了其识别抗原的Mr为（85.0/124.5）×103；并确认5C1 scFv以浓度依赖方式抑制KG1a细胞的同型聚集。结论高效表达纯化的5C1 scFv特异性识别Mr为（85.0/124.5）×103的KG1a细胞膜表面分子，此分子可能是一种在KG1a细胞表面表达的参与细胞同型聚集的分子或受体。这些结果为进一步深入研究抗原本质及克隆抗原分子基因奠定了良好的基础。

关键词：单链抗体、KG1a细胞、同型聚集、免疫印迹、包涵体

所属期刊栏目：21

分类号：R392;R73

在线出版日期：2004-01-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：437-441