10.3760/j:issn:0254-5101.2001.04.004
人乳头瘤病毒16型野毒株L1-E7融合基因重组腺病毒载体构建及在293细胞中表达嵌合病毒样颗粒的研究
目的制备人乳头瘤病毒HPV16L1-E7重组腺病毒,以期获得防治宫颈癌的重组腺病毒减毒活疫苗。方法以HPV16型的野毒株HPV16-114/K为模板,利用PCR克隆技术制备HPV16L1-E7融合基因pUC19L1-E7,含L1的1~301氨基酸(AA)和E7的1~60 AA的编码DNA序列;并转入腺病毒穿梭质粒pCA14L1-E7,与腺病毒质粒pBHG10共转染293细胞,筛选重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7。以PCR、ELISA和Western blot方法鉴定重组病毒及其表达的L1-E7蛋白,密度梯度超速离心纯化HPV16嵌合L1-E7 VLP,电镜观察VLP的形态结构。结果 PCR-DNA序列分析表明成功构建了HPV16L1-E7重组质粒pUC19L1-E7;并获得HPV16重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7,在293细胞中可高效表达L1-E7蛋白,并形成嵌合病毒样颗粒(cVLP)。结论构建的重组腺病毒rAd5HPV16L1-E7可有效表达HPV16L1-E7 cVLP,可进一步用于动物实验,研究其在防治宫颈癌中的作用。
乳头状瘤病毒、病毒样颗粒、腺病毒载体、疫苗、宫颈肿瘤
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R37(医学微生物学(病原细菌学、病原微生物学))
国家自然科学基金39670038;山东省自然科学基金Y96C10042
2004-01-08(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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